复发性流产影响生命全程保健的免疫病因学研究

复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)的病因十分复杂，主要包括遗传因素、解剖因素、内分泌因素、感染因素、免疫功能异常、血栓前状态、卵巢衰老、孕妇的全身性疾病及环境因素等。RSA是严重危害女性健康及其生命全程包括老年期健康的常见病，病因学复杂，有50%的患者病因不明，因此一直是女性涉及生命全程的保健医学的热点和难点问题之一。妊娠不同时期的RSA，其病因有所不同，妊娠12周以前的早期流产多由遗传因素、内分泌异常、生殖免疫功能紊乱及血栓前状态等所致；妊娠12周至28周之间的晚期流产且出现胚胎停止发育者，多见于血栓前状态、感染、妊娠附属物异常(包括羊水、胎盘异常等)、严重的先天性异常(如巴氏水肿胎、致死性畸形等)；且除此之外，临床上还有近一半的RSA患者原因不明，称为不明原因复发性流产(Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA)，是临床上难治性疾病之一。该病对患者及其家属的身心健康和生活质量造成了严重损伤，因此，对RSA致病机理研究具有重要的治疗指导意义。本研究进行URSA与抗层粘连蛋白-1抗体的相关性研究，现将具体结果报道如下。

1.资料与方法

1.1 资料来源 URSA组选择2015年1月至2016年12月在北京市友谊医院妇产科复发性流产专科门诊就诊的URSA患者30例，平均年龄31.83岁(24～39岁)，所有患者就诊前均连续自然流产2次以上，流产都发生于妊娠20周以前。URSA的诊断标准：①B超或子宫输卵管碘油造影检查排除子宫畸形或子宫颈机能不全；②子宫颈黏液支原体和衣原体培养排除感染因素；③患者夫妻双方以及流产组织的染色体筛查排除染色体异常；④激素水平测定排除黄体功能不全、高催乳素血症、高雄激素血症以及代谢性疾病、甲状腺功能异常等；⑤自身免疫性疾病相关抗体筛查，包括抗核抗体、抗心磷脂抗体、狼疮抗凝物以及抗可提取核抗原(ENA)抗体均为阴性；⑥患者丈夫的精液检测结果正常。对照组1选择同期156例无不良妊娠史的健康妇女，平均年龄29岁(24～38岁)，对照组妇女均无肝、肾疾病，无自然流产史、早产史、血栓或出血史、妊娠期高血压疾病史，并且至少有1次成功的妊娠分娩史。为保证遗传背景的一致性，所有受试者(包括URSA组和对照组)均来自北京市西城区，签署知情同意书后抽取血液标本。对照组2按照年龄匹配因素，选择同期50例无不良妊娠史的健康妇女作为对照，平均年龄30.90岁(28～35岁)。

1.2 实验方法

1.2.1 应用ELISE方法，层粘连蛋白-1抗体测定[1]：聚丙乙烯板(corning costa 9018)上包被10μg/ml的Laminin-1，体积为100μl/孔，封口，4度孵育过夜[2]。吸走弃去包被液。每孔加入250μlwash buffer，震荡1min，清洗3次[3]。每孔加入200μl的10%的胎牛血清，室温封闭1h[4]。wash buffer洗涤1次[6]。加入100μl梯度标准品或者1:400稀释后的待测血清。并设置至少两个孔的空白。封口，室温孵育2h(或4度孵育过夜，提高灵敏度)[7]。wash buffer洗涤3～5次[8]。加入100μl 1:5000稀释的HRP标记的抗IgG抗体，室温孵育1h[9]。洗涤，每次震荡1～2min，wash buffer洗涤5～7次[10]。加入100μl/孔反应底物TMB，室温孵育15min[11]。每孔加入50μl终止液(stop solution)，在450nm波长及570nm波长检测吸光度，结果用450nm吸光度值减去570nm波长下检测吸光度。

1.2.2 取受试者早晨空腹时肘静脉血5ml，静置1h后，2000r/min离心15min，取血清置于-70℃冰箱保存待测。按照试剂盒说明书应用酶联免疫吸附实验法测定血清中的VEGF(Invitrogen)及s-Flt-1(Invitrogen)浓度。简要步骤为：①用Wash Buffer洗两次Elisa孔；②在所有标准孔中倍比稀释的标准品；③在指定样品孔中加入50μl样品；④向所有孔中加入50μl的Biotin-Conjugate；⑤在室温下(18～25℃)，盖上板子，孵化2h；⑥倒掉所有孔的溶液，Wash Buffer洗板子6次；⑦向所有孔中加入100μl稀释的Streptavidin-HRP，室温下孵育1h；⑧倒掉所有孔的溶液，用Wash Buffer洗板子6次；⑨向所有孔中加入100μl的TMB底物溶液，室温下孵育30min；⑩向所有孔加入100μl Stop Solution；在450nm波长及570nm波长检测吸光度。

1.3 统计学方法 实验数据采用SPSS 20.0软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差表示，差异性分析采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 一般临床资料

2.1.1 由表1可见，两组妇女的年龄没有显著差异(P=0.192)，具有可比性。对照组由于是孕中期的孕妇，因此体重指数明显高于URSA组(P=0.001)。

表1两组一般临床资料比较组别例数(人)年龄(岁)体重指数(kg/m2)健康组5030.组3031.

文章来源：《中华保健医学杂志》 网址: http://www.zhbjyxzz.cn/qikandaodu/2021/0707/1157.html